仪器法
应用仪器测定菌数是现代菌数检测技术的一种发展动向。粒子计数器用于菌数检测已有报道,但本法仅适用于无杂质颗粒供试液的菌悬液计数,一般不适用于药品的染菌量检测,因为任一杂质颗粒都会误计在内。下面作扼要介绍∶
粒子计数器的基本原理:电解溶液经过有孔管的微孔时有电流,当任何相对不导电的粒子通过微孔时,微孔内电阻增大,使微孔切面上电压增高,致使两端电压发生变化,通过微孔的每一粒子增大电压可以被放大、记录和计数。细菌细胞则属不导电的粒子,可被计数。
粒子计数器的主体部分为有孔管,其余为电子测量和记录部分。有孔管的孔径有10μm、30μm、100μm等,可以根据粒子大小而选择。有孔管的一端连结真空泵与水银压力计,水银压力计上装有液量计测的电极接点。测定电极的正极在有孔管内,负极在烧杯中。测定开始时,将有孔管置入被测菌悬液中,打开真空泵活塞、减压、菌悬液进有孔管内,同时水银压力计上升。关闭活塞测定开始,水银压力计缓慢向左移动,相应的流人菌悬液。其中计量决定于电极1和2的距离。电压变化形成脉冲,经放大后进入示波器,计数。
粒子计数器的计数能力≥5×104/分,并能在若干秒内按颗粒大小决定出分布。粒子计数器的最大缺点就是它只识别颗粒大小,而不能区分是否细胞,其次混合各种细胞时,测定误差较单一菌株为大。
除粒子计数器外,应用电路的阻抗特性变化,进行细菌总数测定也有报道。菌数的检测还有其他方法,例如比浊法、光密度法、菌体干重法、叠集细胞体积法等,但这些检测法都要求较大菌量,不太适用于药品染菌量的测定。