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微生物检验-细菌计数(二十三)
发布时间:2022-02-26浏览:643

计数板法

本法采用血球计数板或其他计数板进行细菌计数。在我国常用有托马及改良的纽氏计数板。现以改良的纽氏计数板为例说明如下∶

1. 改良的纽氏计数板 为一长方形厚载玻片。中央部位前后各有一个计数池,上有刻线。每池为9大方格,共为9mm2,每一大格其面积为1mm2,深度为0.1mm,中央的大方格分成400个小方格,在纵横第1、5、9、13、21行列中各加一条划线,使成双线。这样将大方格分成25个中方格,每一中方格中有16个小方格,总计400个小方格。

2.测定菌数的步骤

(1)制备含菌量适宜的样品供试液;

(2)清洁计数池,并盖上与计数池配套的盖玻片,以毛细滴管将供试液谨慎地从计数池侧面渗入计数池内,切勿使池内存留气泡。稍待片刻,使菌体沉降,再以高倍物镜进行计数;

(3)计数有两种方式∶

①实数法∶即计数全部400个小方格内的菌体细胞数。供试液含菌量/ml=全部40 小方格内菌数总和,再乘以104

②定点计数法∶计数方格的四角及中央5个中方格,共计80个小格中的菌数。供试液含菌量/ml=80小方格菌数总和,再乘以5× 104

应指出,计数时应按一定顺序进行,对于压线菌细胞,可按计数上与左,不数右与下的原则、以免重复计数。

计数板法是计算总数的方法,是按形态特征计数,不分"死菌"与"活菌"。所以不是活菌计数。有时也可以用染色法区分"死菌"与"活菌",加以计数。但染色活菌不一定是具繁殖力的菌细胞。因此,染色活菌与平板法、MPN法的活菌是不能等同的。本法不仅适用于细菌计数、也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。但因各种技术原因,如滴样方法、供试液的均匀程度,菌体(孢子)的成丛性、观察液层焦点视野厚度不一以及细菌运动等、均可引起计数的误差,同时本法仅适用于染菌量大的供试品。此法误差大、但其设备简单,方法易行。