对于安徽省蚌埠市无菌检验员培训学员来说，穿刺保藏法和活化是常见菌种保藏及活化技术之一，也是无菌检验员培训学员应知应会知识，和无菌检验人员的基本技能之一，因此，今天写个文章，说说这个事儿。
安徽省蚌埠市无菌检验员培训知识之穿刺保藏法和活化
1.穿刺保藏法操作步骤
穿刺保藏法原理是缺氧和低温，即菌种保存在半固体培养基内部，造成缺氧环境，然后保存于4℃，延长菌种时间。
(1)制备半固体培养基
半固体培养基跟固体培养基的区别在于琼脂粉含量不同，前者琼脂粉含量1%，后者含量1.5%-2%。
半固体培养基添加至无菌试管约1/3处，营养不宜太丰富。
值得注意的是，半固体培养基配制好后需要竖起来，不需要摆斜面。
(2)接种
用接种针挑取少量细菌，从半固体培养基的中心垂直刺入，直至接近半固体培养基1/2处自上而下穿刺，不要穿透，然后沿原穿刺线将接种针退出，穿入培养基若干次，放置于恒温培养箱中培养，待微生物生长良好后，用2毫米无菌液体石蜡覆盖，以创造缺氧环境并4℃保藏。
(3)保藏时间
一般3-6月后转种。
有的菌种保存时间至少可以达到1 年，有的菌种甚至能达到20 年之久。
(4)穿刺保藏法适用对象
适用于工程大肠杆菌等细菌，操作简便，保存时间较长。
(5)穿刺保藏法优点
操作简便，保存时间比斜面保藏法长。
(6)穿刺保藏法缺点
比较耗费空间，不便于携带。
2.穿刺保藏菌种活化
用接种环沿着菌种方向穿入，挑取菌种，转接至斜面上或平板培养基上，或加入无菌水摇晃，稀释涂布即可。
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