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微生物实验技术之消毒与灭菌(三十九)
发布时间:2022-02-02浏览:598

过滤通过微生物截留材料过滤的方法广泛应用于热不稳定溶液的灭菌,物理地截留溶液中含有的微生物。过滤器包含开放式或全封闭滤器。过滤介质或滤膜的有效性取决于多孔材料孔径的大小,还可能取决于过滤器对细菌吸附或过滤机制。有证据表明筛滤是其机制中较为重要的环节。应避免使用纤维抽滤器,特别是混合石棉,除非无条件采用其他过滤法。在需要纤维抽滤时,在初始过滤后接着用非纤维抽滤。

  滤膜器规格—滤膜孔径的大小,由一个反映滤膜隔离规定微生物菌种的能力的比率来表示,而不由小孔的平均孔径和标准差来决定。灭菌用滤膜(用于截留主要杂质微生物),在压力不低于30 Psi(Psi每平方英寸磅,2.0巴)时,能100%的隔离107/cmi 个缺陷假单胞菌(Pseudomons diminuta,ATCC 19146)。这样的滤膜通常为0.22 μm或0.2μm。该种规格的滤膜比率也规定了试剂或介质必须经过过滤灭菌(如眼膏和十四烷酸异丙酯)、细菌滤膜(也称分析滤膜)标注的规格为0.45μm,只对较大微生物有截留能力。对0.45μm规格的过滤尚无规定权威方法,这一规格取决于制造商的常规方法、0.45 μm 能截留粘质沙雷菌(Seratia marescers,ATCC 14756)或缺陷假单胞菌培养物。测试压力变化范围从低值(对沙雷菌为5 Psi,0.33巴)到高值(50 Psi,3.4巴)。这是为无菌检测规定的,要求较充分地微生物截留。供试品只被体积小的微生物污染的可能性较小。具有非常低的过滤率的滤膜应用莱氏无胆支原体(Acholeplasma lilowmi)或其他支原体属(Mycoplasma)菌株的培养物在压力为7Psi(0.7巴)下测试,通常比率为0.1μm。当通过其他方式确定时,基于微生物截留性的比率会变化,如采用不同直径的近球形菌的截留,对特殊目的如过滤制品的性质,可选择正确比率的过滤器。一般用户通常不可能重复对过滤能力的测试,而滤膜生产厂对每一批次制造的膜都要进行微生物测试。

    必须了解采用的过滤参数是否严重影响微生物截留效率,在过滤过程中也应关注产品的一致性、药品吸附、保护剂和其他添加剂、初始滤出液的内毒素含量。

过滤的有效性也受过滤溶液的微生物含量的影响,故过滤前,溶液中微生物质量的确定是过滤过程确认的一个重要方面。此外,还要确认如压力、流量和滤器的特性等过滤过程参数。所以描述过滤截留能力的另一种方法是采用对数衰减值(log reduction value,LRV)。例如在上述条件下一个0.1μm 能截留一种菌株 107个微生物的过滤器将具有不低于7个LRV。

为达到灭菌目的,常用装配有统称孔径率0.2μm或更小的膜来进行,根据确认的微生物每平方厘米滤膜表面不低于107个缺陷假单胞菌悬液的过滤来确认。滤膜过滤器在使用前应测初始的完整性,典型的测试方法是始沸点测试,扩散气流测试,压力保持测试和前向流测试。这些测试应与微生物截留相关。