分离技术-划线分离法
划线分离法 此法简便省时,应用广泛。操作时用接种环挑取培养物。例如挑取样品的增菌培养液一环,在平板培养基表面划线接种。在有强选择性的SS、HE琼脂乎板上划线,又宜随增菌培养液中混浊生长的浓度不同,取2~3环接种。一手持平板并撑开,使盖与平板约呈45°角朝向右方,一手持接种环伸进到平板表面,进行划线分离,动作要轻盈自如,线条要均匀相间,充分占用整个平板的表面。
(1)分段划线分离法:菌苔或浓的菌液多用此法进行分离。从平板表面涂抹培养物的地方开始划线,每划连续的一组线段后,接种环经烧灼灭菌并冷却,再与上段划线相交数次划出下一组的连续线段,如此划到第4或第5段,合盖即成。
(2)连续划线分离法∶含菌量较少的菌液多用此法进行分离。从平板表面涂抹培养物的地方开始划线,连续向整个表面左右展开并一直划完,形成一条接种曲线。
在划线分离中,沿接种线上各点分散种有菌细胞,先划的线段因菌多而生长密集,常呈菌苔,随着接种线推后,菌量就逐渐减少,出现越来越多的单个菌落。非接种线的部位应无菌落出现。如果没有或很少有单个菌落,只见长成串珠状,甚至成片状的菌苔,是分离失败。
作划线分离的各种平板培养基,均应保持适宜的湿度,在表面不能有凝集水,以免细菌在接种线蔓延生长,菌落相互依连。故对新制备的平板,常在临用前置37℃温箱内蒸发,除去凝集水后,即可应用。