接种、分离、培养
接种、分离、培养是微生物学实际工作中应用最多的基本技术方法,也是药品微生学检验中最基本的技术。这里重点介绍细菌的接种与分离技术以及多种培养方法。
接种:是指将含有或可能含有菌细胞的样品、或菌细胞的培养物,种入培养基中的技术方法。
转种:是指将甲培养基内的培养物移种至乙培养基内,也是接种。
接种过的培养基置适宜环境条件中进行培养,使菌细胞生长繁殖。
分离:是指使用一定的接种技术,将混杂存在的菌细胞尽可能地在培养基中分开而散在生长,能获得单一的一种菌株的方法。
检验工作是要求分离出待检菌(或称为目的菌),供作鉴定。例如药品的大肠埃希氏杆菌检验,就是从口服药品中分离出可疑是该菌的菌株,使成纯培养物来作鉴定。
分离法也用于活菌计数,例如药品细菌总数的测定、霉菌和酵母菌总数的测定,就是尽可能使样品中的菌细胞在平板培养基上分离散开,各自长出菌落,以每个菌落代表一个菌细胞,计数菌落而测定出所含的活菌数。用于分离的培养基经接种后,置于适宜环境条件中培养,称为分离培养。
接种和分离所使用的工具,最常用的是接种环和接种针,是由一绝热的电木柄中的金属棒,连接上70 mm长的镍铬合金丝或白金丝制成。接种针的丝应笔直而无任何弯曲;接种环是将接种针的顶端扭成3 mm直径的正圆形封闭环而成。
接种和分离技术,一般是在洁净室内的超净工作台上进行,为严格的无菌操作。
凡已接种过的培养基,均要在适宜的环境条件中进行培养。适宜的环境条件是指温度、湿度、培养的时间,尤以对氧与二氧化碳的需要情况等因素要适宜。根据待检菌的不同,有不同的培养方法。例如口服药品的大肠埃希氏杆菌检验、沙门菌检验,是用需氧培养;用于阴道、创伤、溃疡的破伤风杆菌检验,要用厌氧培养。