菌种的保存、复苏、传代是无菌检验员必备知识和能力之一，也是无菌检验员培训的基础知识。考虑到相关内容较多，先来说说冻干菌种的复苏。
无菌检验员培训知识之菌种的复苏
1、冻干菌种的复苏
1.1复苏菌种前应准备适于菌种生长的固体、液体培养基和培养设备，所有操作均应在合适的生物安全防护条件下进行。
1.2用75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖，注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用75%酒精棉消毒瓶口部分，将液体培养基吸取至菌株西林瓶内，溶 解冻干物。
1.3旋紧旋盖，让菌悬液在振荡 器上混匀约 10s促使溶解均匀。
1.4 将菌悬液吸出，接种至液体培养基内。用接种环取菌液划线接种于琼脂斜面培养基上。
1.5 将已接种的液体培养基及琼脂斜面培养基置规定温度下（一般细菌在30~35℃，真菌在20~25℃）培养24h。
1.6 取出培养物（第1代），仔细观察菌苔形态、有无杂菌，必要时涂片、革兰氏染色镜检，若呈典型菌落即可应用。如发现菌型不典型，可进行平板分离单菌落。
2、为保证工作用菌株的传代次数不超过5代，并减少购买冻干菌种的次数，可在对冻干菌种复苏的同时制备部分菌悬液（第1代）冷冻保存，并将此冻存菌液复苏后的第2代培养物冻存保藏。
2.1准备 ：
①冻存保护液（40%无菌甘油）及灭菌冻存管。
②细菌冻存液：由液体培养基与冻存保护液按1：1比例混匀制成。
3、冻存菌悬液的复苏
3.1准备：
①用具：移液枪、酒精灯、接种环。
②培养基：根据菌种的特性选择适宜的液体培养基（如营养肉汤培养基、硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基等）、琼脂斜面或平板培养基。
③消毒液：75%酒精、0.1%新洁尔灭或84消毒液等。
3.4 将上述接种后的培养基在规定温度下培养（细菌在30~35℃恒温培养18-24小时，真菌在20~25℃恒温培养24-48小时，黑曲霉*培养5~7天）。
3.5 仔细观察培养物：如呈典型菌落即可作为日常工作中使用的菌种，注明菌名、编号、代次和接种日期后，置2~8℃冰箱内保存；如发现菌苔形状不典型，可进行平板分离单菌落。