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安徽省宣城市无菌检验员培训知识之冷冻真空干燥保藏法
发布时间:2025-07-29浏览:25

对于安徽省宣城市无菌检验员培训学员来说,冷冻真空干燥保藏法是应知应会知识。冷冻真空干燥保藏法的原理是将菌种冷冻,在减压下利用升华作用去除水分,使细胞的生理活动趋于停止,从而使菌种长期维持存活的状态。一起来看具体内容。

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安徽省宣城市无菌检验员培训知识之冷冻真空干燥保藏法

1.冷冻真空干燥保藏法

(1)制备菌悬液

将处于成熟期的微生物培养物悬浮于无菌的脱脂奶粉或者海藻糖等保护剂中制成浓菌液,分装到无菌的安瓿瓶中。
(2)抽真空,干燥
将上述安瓿瓶放置于低温冰箱中冷冻,达到预定温度后对浓菌液进行冷冻干燥处理,之后在真空状态下融封安瓿瓶,于20℃保藏。
(3)保藏时间
五到十年,因保藏期较长,一定要标记清楚,以免遗忘。
(4)适用对象
适用于大批量菌种的长期保存。该保藏法是目前适用范围最广,保藏效果最好的方法,如果需要长期保藏就选择这种方法。
(5)优点
适用范围广,保藏效果好,存活率高,变异小,便于携带。
(6)缺点
因涉及到冷冻抽真空设备,一般实验室不具备条件,需要到专门保藏机构保藏,成本增加。
2.冷冻真空干燥保藏菌种活化
(1)安瓿瓶开封

先用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用酒精灯火焰将安瓿管顶端适度加热,然后用移液器取少量无菌水,将无菌水滴至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂,最后用挫刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。

(2)复活方法
先用移液器吸取0.3-0.5mL适宜的液体培养基,滴人安瓿管内,轻轻振荡,使菌体溶解呈悬浮状,然后取0.1-0.2mL菌体悬浮液,移植于适宜的斜面或平板培养基上,剩余的菌液,注入适宜的液体培养基内,适宜的温度下培养。

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