对于安徽省马鞍山市无菌检验员培训学员来说，细菌培养及菌落计数是基本功及应知应会知识，对于菌落形态及生长趋势，有时候会因为各种各样的原因出现异常形态的菌落形态，本文为大家说说平板菌落集中生长的原因，一起看正文。

安徽省马鞍山市无菌检验员培训知识之平板菌落集中生长的原因

平板上的菌落集中在一起（而不是均匀分布）通常由以下几个原因造成：

1.涂布不均匀：

没有将菌液均匀地涂抹在整个平板表面。

涂布时间不够，菌液未被充分吸收。

涂布时用力过猛或过轻。

涂布棒温度过高（未充分冷却）烫死了部分菌或导致局部菌液快速干燥。

涂布棒在同一个区域停留时间过长。

最常见的原因：

使用涂布棒（L棒）进行涂布时：

解决方法：确保涂布棒无菌且冷却；加入菌液后静置几分钟让其吸收；以适中的力度、快速、有规律地旋转平板并移动涂布棒覆盖整个表面（通常划“之”字形或同心圆）。

2.样品/菌液未充分混匀：

如果样品（如水样、土壤悬液）或稀释的菌液在吸取和加入平板前没有充分振荡混匀（例如使用涡旋振荡器），菌体细胞会聚集在一起。吸取时可能只取到了聚集的部分，导致加入平板的菌液本身就不均匀，局部浓度过高。

解决方法：在每一步稀释或取样前，务必充分振荡或涡旋混匀样品/菌液。

3.倒平板时操作不当：

培养基温度过高：如果向培养基中加入菌液（倾注法）或涂布前倾倒平板时，培养基温度过高（远高于50℃），加入的菌液会被烫死或损伤，导致局部区域菌落减少或缺失，而未被烫到的区域菌落就可能相对集中。

加入菌液后未充分混匀：在倾注法中，将菌液加入无菌培养皿后，倒入融化并冷却的培养基，必须立即、充分地在水平面上旋转混匀（通常8字形晃动或旋转），使菌体均匀分散在培养基中。如果混匀不充分，菌体就会聚集在底部或某个区域。

培养基凝固过快：环境温度过低或操作太慢，导致培养基在混匀完成前就开始凝固，使菌体无法均匀分散。

解决方法：确保培养基冷却至合适温度（45-50℃，手摸不烫）；加入菌液后立即、快速、充分混匀；在适宜温度环境下操作。

4.菌种本身的特性：

自聚集性：某些细菌或酵母天然具有聚集形成团块或生物膜的倾向（如某些链球菌、葡萄球菌、假丝酵母）。即使经过振荡，它们也可能迅速重新聚集。当这些聚集的团块涂布或倾注到平板上后，每个团块会长成一个包含很多细胞的菌落（而不是分散成单个菌落），看起来就是一堆菌落挤在一起。

解决方法：很难完全避免，但可以通过更剧烈的振荡（如加入玻璃珠涡旋）、使用表面活性剂（需确认不影响生长且无菌）或在培养基中加入抑制聚集的成分（如高浓度盐对于某些葡萄球菌）来尝试改善分散度。有时需要接受这种特性。

5.培养基缺陷或污染：

局部干燥：平板在培养前放置过久或培养箱湿度不够，导致平板局部（尤其是边缘）干燥，抑制了该区域的生长，菌落只能在相对湿润的区域集中生长。

局部成分不均/缺陷：培养基未完全溶解混匀，或者倾倒平板后局部产生了沉淀或水汽凝结，导致局部营养成分不足或抑制物存在，抑制了该区域的生长。

局部污染抑制剂：平板表面被意外喷洒了消毒剂（如酒精）或其他抑制剂，导致局部无菌生长。

解决方法：倒好的平板及时使用或密封保存；确保培养基完全溶解混匀；培养箱保持适当湿度；操作时注意避免污染平板表面。

6.凝固水的影响：

平板凝固后，盖子上常会有冷凝水。如果平板在培养前或培养初期被移动、倾斜或震动，盖子上的冷凝水可能滴落到琼脂表面。水滴落的地方会冲散或抑制该处菌的生长，导致菌落分布不均，未滴到水的地方可能显得相对集中。

解决方法：倒好的平板静置凝固后，在培养前将平板正置（盖子在上）放置一段时间，让多余冷凝水流下蒸发或吸收；培养过程中尽量减少移动和震动；避免平板堆叠过高。

7.气流影响：

在无菌操作台内，如果气流（如超净台的垂直气流或生物安全柜的气幕）直接吹向正在涂布或刚加入菌液的平板，可能导致液体（含菌）被吹向一边聚集。

解决方法：操作时注意气流方向，避免气流直接吹向敞开的平板。

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