试管稀释法(试管法、MPN 法)
1. 稀释法原理 将未知菌量的供试液以一定倍数(如10倍)逐级稀释后,取定量稀释液分别接种数支(如5支)装有固定量培养基的试管中,经培养后,根据生长管数,按数理统计法判断出含菌数量。
例如:10-2、10-3、10-4三级稀释液,每级各接种5支,每支接种量1ml。经培养后,生长情况为:10-2级全部生长;10-3级2支生长,3支未生长;10-4级全部不生长。生长细菌的管称阳性管,不生长细菌的管称阴性管。阴性管是由于其中未接种上细菌所致。从接种10-2、10-3、10-4三级稀释液各5支,经培养得阳性管数是5、2、0,据此可粗略推断出供试液中含菌量是在102~103个/ml之间。
进一步应用数理统计法可计算出较精确的含菌数,称为最大可能数(Most probable num-ber,简称 MPN)。
MPN 是建立在以下条件为基础的统计数值,即:
①细菌不互相凝集、不相互排斥,随机分散在被检液体中;
②所用培养基应保证每个菌细胞皆可生长并在操作中不受污染;
③试管中的细胞分布符合 Poisson分布。
MPN 值、许多书中均有现成系列检索表,按稀释培养得到的阳性管数可直接查表。