今天继续为大家科普无菌检验员培训知识。细菌内毒素是在革兰氏阴性细菌的细胞壁中发现的脂多糖 (LPS)。当内毒素进入血液或 CSF（脑脊液）时会引起发热，因此也称为热原。在制药行业，测试细菌内毒素是必不可少的。细菌内毒素或热原测试是在药物和与心血管、淋巴系统或脑脊液相关的医疗设备等医疗效果释放之前对内毒素进行的体外测试。

一、细菌内毒素检测的重要性

革兰氏阴性菌无处不在，细菌产生的内毒素可引起发烧作为炎症反应。内毒素可以从医疗器械、注射药物、水或任何与患者血液接触的物体中获得。这种反应有时可能是致命的，尤其是在免疫功能低下的人、儿童和老年人中。

热原或细菌内毒素测试是 FDA 批准的确定热源元素（如内毒素）的方法。这些测试对于降低患者交叉感染的风险至关重要。

热原检测不同于无菌检测，两者应同时进行。无菌检测通常检测微生物产生的活生物体或孢子。无菌检测无法检测内毒素，因此必须进行热原检测。

二、细菌内毒素和热原检测方法

细菌内毒素和热原的检测方法简单、易行、可行。检测细菌内毒素的不同方法有细菌内毒素试验 (BET) 或鲎变形细胞裂解物 (LAL) 测定、重组因子 C (rFC) 测定、单核细胞活化试验 (MAT) 和兔热原试验 (RPT)。

（一）兔子热原测试

兔子热原测试是一种更具侵入性的检测样本中热原存在的方法，涉及将样本注射到多只兔子体内。致热物质的存在导致兔子在注射 3-6 小时后发热。它也被称为假试验。

由于该方法涉及动物试验，因此被单核细胞活化试验 (MAT) 和鲎变形细胞裂解物 (LAL) 测定广泛取代。

RPT原理：

兔子热原试验 (RPT) 的基础是测量兔子在静脉内注射待测样品的无菌溶液后温度的升高。如果样品中含有热原，兔子的体温会升高0.6℃。

RPT操作步骤：

进行兔热原试验 (RPT) 的程序大致分为两个步骤；初步和主要测试。

初步测试

1.选择至少两周未使用的三只兔子。调理 1-3 周。

2.停止食物供应 2 小时的测试。记录他们的体温。应该在38.5℃左右。

3.90 分钟后通过静脉注射无热原盐水。

4.注射 30 分钟后检查温度，并继续检查温度另外 3 小时。

5.如果温度升高 0.6℃，则拒绝该动物并选择其他动物。在新动物身上重复初步测试。

主要测试：

1.首先，将样品与无热原水混合并在进样前加热至38℃。

2.预试选出的家兔在实验前2小时禁食。

3.记录初始温度（以 30 分钟为间隔的两个温度的平均值）。两次读数相差>0.2℃的兔子不能用于实验。

4.以不低于0.5 ml/Kg且不超过10 ml/kg的量将准备好的样品注射到三只兔子的耳朵边缘静脉中。

5.每隔 3 小时 30 分钟记录一次动物的体温。

结果分析：

情况一：没有一只兔出现个体体温升高0.6℃，即3只兔体温升高之和不超过1.4℃。这意味着没有热原。

案例二：两只或三只兔子体温升高≥0.6℃或体温升高总和超过1.4℃。它表明样品中存在热原。

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