根据细菌对氧与二氧化碳需要的情况,有以下几种不同的培养方法:需氧培养法、厌氧培养法、微需氧培养法、二氧化碳培养法。
厌氧培养法 厌氧菌的培养,必须在无氧的环境中进行。对用于阴道、创伤、溃疡的中药制剂作破伤风梭菌检验,须用厌氧培养。产气荚膜梭菌也是厌氧菌,在无氧的环境中培养,生长良好。最佳的厌氧培养设备,是厌氧培养箱。
(1)厌氧培养箱法∶此即厌氧手套箱法。该箱箱体内有操作室和培养箱,箱架内有二个压缩气体的钢瓶,一个是 N2,另一个是80%N2、10%H2、10%CO2的混合气体,供向箱内输入。箱内的O2被充入的N2换掉,剩余的O2在钯粒催化下与输进的H2化合成水,保持箱内为无氧状态。使用时,通过一双乳胶手套将手伸进密闭的操作室内操作自如。制作厌氧培养基、接种样品和转种培养物、培养和鉴定厌氧菌的所有技术操作,均在箱内进行。
(2)抽气换气法∶用带活塞的玻璃真空干燥缸进行。启动真空泵,将缸中空气抽去90%,随即充入N2,如此反复进行2次,第3次抽气后,充入80%N2、10%H2、10%CO2。当亚甲蓝指示剂无色时,即可置37℃培养。
(3)厌氧缸法:此法是用化学试剂的反应取代抽气换气的复杂过程,在缸内形成无氧状态的方法。用顶端无外通阀门的玻璃干燥缸,按缸内容积每立升,置入硼氢化钠0.22g、柠檬酸0.33g、碳酸氯钠0.37g,供产生 CO2和H2。通过系列操作使成为厌氧缸。置37℃培养。
(4)厌氧菌培养罐法∶厌氧菌培养罐的结构和性能良好,适用,易于操作,效果可靠,故被广泛应用。普遍使用的是装12个平板的小型厌氧菌培养罐。
(5)厌氧菌简易培养袋法∶厌氧菌简易培养袋是一种14cm×32cm的塑料袋,透明不透气的无毒复合型塑料薄膜制成。袋内装有作用不同的三个小管。分别是气体发生管、钯粒催化剂管、亚甲蓝指示剂管。当指示剂与袋内气体接触,仍保持无色而不变蓝,表示袋内为无氧状态,即可置 37℃培养。
专性厌氧菌的生长繁殖,除采用上述某种厌氧培养法为其创造无氧环境外,尚应充分重视选用适宜的厌氧菌培养基。